血磷濃度檢測試劑盒說明書
微量法
注意:正式測定之前選擇2-3 個預期差異大的樣本做預測定。
規(guī)格:100T/96S
測定意義:
血磷主要指血中的無機磷, 以無機磷鹽的形式存在。血漿中鈣、磷濃度關(guān)系密切,在以 mg/dL表 示時,二者的乘積( [Ca] × [P] )為 30~40 。當( [Ca] × [P] )>40 ,則鈣和磷以骨鹽形式沉積于骨 組織;若( [Ca] × [P] )<35 則妨礙骨的鈣化,甚至可使骨鹽溶解,影響成骨作用。血鈣和血磷含量 的相對穩(wěn)定依賴于鈣、磷的吸收與排泄和鈣化及脫鈣兩種代謝的相對平衡。上述平衡受到維生素 D3 、 甲狀旁腺素和降鈣素等激素的調(diào)節(jié)。
測定原理:
去除血清中有機磷后,無機磷鹽與鉬酸銨試劑生成磷鉬酸,被硫酸亞鐵還原后呈藍色,在620nm 有光吸收;通過測定620nm吸光度,計算血液中磷含量。
自備儀器和用品:
離心機、可調(diào)式移液槍、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、和蒸餾水。 試劑組成和配置:
試劑一:液體×1 瓶,4℃保存。
試劑二:液體×1 瓶,4℃保存。
試劑三:粉劑×1 瓶,4℃保存。 臨用前配制,依次加入11mL蒸餾水充分溶解,再加入試劑二,充
分混合。
標準液:液體×1 支,1mmol/L無機磷,4℃保存。
血磷濃度測定操作:
1. 分光光度計/酶標儀預熱30min 以上,調(diào)節(jié)波長到620nm ,蒸餾水調(diào)零。
2. 取出標準液,室溫解凍。
3. 血清預處理: 吸取50μL血清,加950μL試劑一,混勻后室溫8000rpm ,離心10min ,取上清液,待 測。
4. 空白管:取微量石英比色皿/96孔板,依次加入50μL蒸餾水,50μL試劑一,100μL試劑 三,混勻后靜置10min ,于620nm測定吸光度,記為A空白管。
5. 標準管:取微量石英比色皿/96孔板,依次加入50μL標準液,50μL試劑一,100μL試劑 三,混勻后靜置10min ,于620nm測定吸光度,記為A標準管。
6. 測定管:取微量石英比色皿/96孔板,依次加入50μL上清液,50μL試劑一,100μL試劑
三,混勻后靜置10min ,于620nm測定吸光度,記為A測定管。
注意:空白管和標準管只需測定一次。
血磷濃度計算:
血磷含量 ( mmol/dL) =[C 標準液×(A 測定管-A 空白管)÷(A 標準管-A 空白管)]× 樣品稀釋倍數(shù) ×V 樣總=2×(A 測定管-A 空白管)÷(A 標準管-A 空白管)
C 標準液:1 mmol/L;樣品稀釋倍數(shù): (50μL血清+950μL試劑一) ÷50μL血清=20。
注意事項:
1 、 試劑三需臨用前配制,如未用完,4℃保存,最多可使用3天;
本產(chǎn)品僅供科學研究使用!請勿用于臨床、診斷、食品、化妝品檢測等用途!
2 、 測定過程中,應盡量避免溶血,因為紅細胞中有機磷酯進入血清后可被酶水解而使得血 清無機磷含量增高。
3 、 最低檢出限為0. 1mmol/L。
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