堿性磷酸酶（AKP/ALP）活性檢測試劑盒說明書

注意：正式測定之前選擇預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

規(guī)格：100T/48S 產(chǎn)品內(nèi)容：

提取液：液體 60mL×1 瓶，4℃保存。試劑一：液體 5mL×1 瓶，4℃避光保存。試劑二：液體 5mL×1 瓶，4℃避光保存。

試劑三：液體 15mL×1 瓶，4℃避光保存，變成藍(lán)綠色不能使用。

標(biāo)準(zhǔn)品：液體 1mL×1 支，2μmol/mL 酚標(biāo)準(zhǔn)液，4℃保存。

產(chǎn)品說明：

AKP/ALP 是一種含鋅的糖蛋白酶，在堿性環(huán)境中可水解各種天然及人工合成的磷脂單酯化合物。

AKP/ALP 廣泛分布于人體各臟器中，以肝臟為主。

在堿性環(huán)境中，AKP/ALP 催化磷酸苯二鈉生成游離酚；酚與 4-氨基安替比林和鐵氰HUA鉀反應(yīng)紅色亞醌衍生物，在 510nm 有特征光吸收；通過測定 510 nm 吸光度增加速率，來計算 AKP 活性。試驗(yàn)中所需的儀器和試劑：

可見分光光度計/酶標(biāo)儀、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、冰和蒸餾水。

操作步驟：

一、粗酶液提取：

稱取約 0.1g 組織，加提取液 1mL 充分研磨，4℃、10000rpm 離心 10min，取上清液待測。血液可直接用于測定，或者適當(dāng)稀釋后用于測定。

二、測定步驟：

1. 分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30 min 以上，調(diào)節(jié)波長到 510 nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 試劑二置于 37℃水浴中預(yù)熱 30 min 以上。

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本產(chǎn)品僅供科學(xué)研究使用！請勿用于臨床、診斷、食品、化妝品檢測等用途！

三、AKP/ALP 活性計算：

1. 按蛋白濃度計算

活性單位定義：37℃中每毫克蛋白每分鐘催化產(chǎn)生 1 μmol 酚為一個酶活力單位。

AKP/ALP (U/mg prot)= [C 標(biāo)準(zhǔn)品×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)×V 樣]÷(Cpr×V 樣)÷T

=0.133×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管) ÷Cpr

2. 按樣本鮮重計算

活性單位定義：37℃中每克組織每分鐘催化產(chǎn)生 1 μmol 酚為一個酶活力單位。

AKP/ALP (U/g 鮮重)= [C 標(biāo)準(zhǔn)品×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)×V 樣] ÷(W÷V 提取×V 樣)÷T=0.133×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)÷W

3. 按液體體積計算

活性單位定義：37℃中每毫升血液每分鐘催化產(chǎn)生 1μmol 酚為一個酶活力單位。

AKP/ALP (U/mL)= [C 標(biāo)準(zhǔn)品×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)×V 樣] ÷V 樣÷T

=0.133×(A 測定管-A 對照管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)

C 標(biāo)準(zhǔn)品：2μmol/mL；V 反總：反應(yīng)體系總體積（mL），204μL=0.204mL； V 樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積（mL），0.004mL；T：反應(yīng)時間（min），15 min；V 提取：加入提取液體積，1mL； W：樣本鮮重，g；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL。

注意事項(xiàng)：

1、 試劑一、試劑二和試劑三均需避光保存。

2、 試劑三變藍(lán)綠色后不能再使用。

3、 加入試劑三后必須立即混勻，否則顯色不*。

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