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兔Streptavidin-HRP試劑盒(帶DAB顯色液)
點擊次數(shù):1200 更新時間:2021-08-30

 

Version06062012

SPRabbitHRPKit(DAB)

Streptavidin-HRP試劑盒(DAB顯色液)



Cat.No.K2035

保存:2-8℃

組分說明

Cat.No.                                                                                   K2035                           K2035A

KitSize                                                                                       3ml                             18ml

內(nèi)源性過氧化物酶封閉液(試劑1,白色液體)                   3ml                            18ml

封閉用正常羊血清工作液(試劑2,白色液體)                   3ml                            18ml

生物素標(biāo)記羊抗兔二抗工作液(試劑3,黃色液體)              3ml                           18ml

HRP標(biāo)記的鏈霉親和素(試劑4,紅色液體)                          3ml                           18ml 

DAB-A液(20×)                                                                       250μl                      1ml

DAB-B液(                                                                       5ml                            20ml



*本試劑盒僅適用于一抗為兔源抗體的IHC實驗





產(chǎn)品簡介

本試劑盒根據(jù)生物素(Biotin)與鏈霉親和素(Streptavidin)具有很強親和力的原理設(shè)計。在兔源的一抗與相應(yīng)的靶抗原

結(jié)合后,本試劑盒中的生物素化羊抗兔二抗與一抗特異結(jié)合;二抗上標(biāo)記的生物素與標(biāo)記了過氧化物酶(HRP)的鏈霉親和

素結(jié)合,形成抗原~特異性一抗~生物素化的二抗~HRP標(biāo)記的鏈霉親和素復(fù)合物。HRP可以催化底物顯色,從而推斷待

檢抗原的存在及分布。該試劑盒使用的生物素化二抗、SA-HRP,均采用優(yōu)化的標(biāo)記和純化技術(shù),使得其染色有更高靈敏度

和更低的背景,適合于檢測福爾馬林固定石蠟包埋組織切片,以及冰凍切片、細胞爬片、新鮮制備的血涂片等。兔Strept-

avidin-HRP試劑盒適合與上海研謹(jǐn)生物即用型或濃縮型抗體配套使用。

注意事項

1.以每張切片加入1滴(約50μl)計算,3ml可做60張切片,18ml可做360張切片。

2.對于內(nèi)源性生物素含量比較豐富的組織,使用本試劑盒時最好用內(nèi)源性生物素阻斷劑進行封閉。

3.DAB工作液現(xiàn)配現(xiàn)用,配制好的工作液2-8°C避光1小時內(nèi)有效。

4.驗過程中避免組織片干燥,因此各步孵育時工作液用量必需充足,保證*覆蓋組織樣本,且盡量在濕盒中進行孵育。

5.獲得最佳實驗結(jié)果,請務(wù)必優(yōu)化實驗條件及試劑用量。

6.DAB為可疑致癌物,使用時請采取必要的防護措施。

7.本產(chǎn)品僅用于科研,不能用于人體反應(yīng)或人體治療。

    `使用方法

1.

常規(guī)處理欲檢測的石蠟或冰凍組織切片或細胞爬片等樣本。

1)組織切片或細胞爬片染色前處理:

a.石蠟切片

脫蠟水化:60oC烤片1小時,二甲苯脫蠟二次,每次5分鐘;再依次浸入梯度乙醇(無水乙醇-無水乙醇-95%

85%75%乙醇)和蒸餾水中各5分鐘水化。

b.冰凍切片和細胞爬片

切片(或爬片)浸于0.01MpH7.4PBS洗滌3×5分鐘。然后用0.1%TritonX-100覆蓋組織(或細胞)浸潤

15分鐘,0.01MpH7.4PBS洗滌2×5分鐘。

2)石蠟切片的抗原修復(fù):絕大大多數(shù)情況下,石蠟組織切片用檸檬酸緩沖液高壓修復(fù)都是適合的。

修復(fù)工作液配制:1L去離子水中加入10ml檸檬酸緩沖液(IHC抗原修復(fù)液,100×)Cat#YJ0128),混勻即可。

修復(fù)過程:修復(fù)液加入高壓鍋內(nèi),待修復(fù)切片浸于修復(fù)液中(必需沒過組織),蓋上壓力鍋蓋,加熱至均勻噴汽,

從噴汽開始計時,1~2分鐘后壓力鍋離開熱源,自然冷卻至室溫,取出切片,蒸餾水淋洗后,再用PBS

0.01MpH7.4)漂洗2次,每次3分鐘。

2.滴加適量試劑1(內(nèi)源性過氧化物酶封閉液),室溫孵育10分鐘,PBS充分淋洗。

3.滴加適量試劑2(封閉用正常羊血清工作液),室溫孵育10分鐘,甩干。

4.滴加適量一抗工作液(商品化即用型抗體或適當(dāng)比例稀釋的濃縮抗體),按實驗要求孵育,然后PBS充分淋洗。

5.滴加適量試劑3(生物素標(biāo)記羊抗兔二抗工作液),室溫孵育10分鐘,PBS充分淋洗。

6.滴加適量試劑4HRP標(biāo)記的鏈霉親和素),室溫孵育10分鐘,PBS充分淋洗。

7.DAB顯色工作液配制:根據(jù)需要量,將試劑A和試劑B119的體積比混勻后即為DAB顯色工作液。也可選擇每

毫升試劑B中滴加1滴(約50μl)試劑A,混勻即可。

8.顯色:加適量的DAB顯色工作液于需要顯色的組織切片或細胞爬片上即可顯色,顯色時間一般為1~5分鐘。顯微鏡下

觀察控制顯色時間,當(dāng)達到最佳顯色效果后,自來水沖洗終止顯色。顯色后的切片經(jīng)復(fù)染、脫水透明,封片后可長期保

存。

 

實驗代做服務(wù):

 

WB代做

HE染色

免疫熒光染色

蛋白相互作用分析

ELISA免費代檢測

免疫組化

熒光定量PCR

番紅O固綠染色

流式細胞檢測

激光共聚焦

透射電鏡服務(wù)

DNA甲基化實驗

免疫共沉淀(Co-IP

DNA甲基化

掃描電鏡實驗

microRNA 測序

半定量RT-PCR

分子克隆和質(zhì)粒載體構(gòu)建服務(wù)

原位雜交(FIsh)

石蠟/冰凍切片

RNA結(jié)合蛋白免疫沉淀(RIP

CCK8檢測

蛋白雙向(2-D)電泳

蛋白雙向2D-WB

ATP/ADP檢測

Taqman探針

細胞劃痕

基因組DNA提取



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